??第34卷第2期(2008)??????????????????????????

PLANTPROTECTION??Vol.34No.2(2008)調(diào)查研究

[5]??吳學(xué)宏,劉西莉,劉鵬飛,等.西瓜種子帶菌檢測及殺菌劑消

毒處理效果[J].農(nóng)藥學(xué)學(xué)報(bào),2003,5(3):39??44.

[6]??劉西莉,牡麗丹,王紅梅,等.紅花種子帶菌檢測及藥劑消毒

處理[J].植物保護(hù),2003,29(6):49??51.

[7]??楊力鋼,黃中喬,劉鵬飛,等.甘草種子帶菌檢測及藥劑消毒

處理效果[J].植物保護(hù),2006,32(5):84??87.

[8]??國際種子檢驗(yàn)協(xié)會.InternationalRulesforSeedTesting[M].

北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,1996,173.

[9]??尼爾高P.種子病理學(xué)[M].狄原渤譯.北京:農(nóng)業(yè)出版

社,1984.

[10]方中達(dá).植物研究方法[M].北京:農(nóng)業(yè)出版社,1979.[11]

魏景超.真菌鑒定手冊[M].上海:上海科學(xué)技術(shù)出版社,1997.

[12]王德興,崔良基,魏守恩,等.包衣劑在油用向日葵種子上的

應(yīng)用效果研究??不同藥種比對種子發(fā)芽與出苗的影響[J].雜糧作物,2003,23(4):237??238.

上述研究結(jié)果對于食葵種子科學(xué)調(diào)運(yùn),及苗期

病害的防治具有一定的參考價(jià)值。進(jìn)行種子的健康檢測和藥劑的消毒處理,可以避免或減輕因病害發(fā)生蔓延而造成的產(chǎn)量和經(jīng)濟(jì)上的損失,為實(shí)現(xiàn)食葵的高質(zhì)高產(chǎn)奠定基礎(chǔ)。

參考文獻(xiàn)

[1]??賈愛紅,楊新元,王鵬冬,等.向日葵主要病害的發(fā)生及綜合

防治[J].山西農(nóng)業(yè)科學(xué),2004,32(3):61??.

[2]??李健強(qiáng),劉西莉,王鋒,等.小麥黑胚病種子帶菌的光鏡和掃

描電鏡觀察[J].植物病理學(xué)報(bào),1999,29(1):22??26.

[3]??劉西莉,李健強(qiáng),朱春雨,等.不同水稻品種種子帶菌檢測及

藥劑消毒處理效果[J].中國農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2000,5(5):42??47.[4]??李健強(qiáng),劉西莉,朱春雨,等.云南省玉米種子帶菌檢測及種衣

劑處理的生物學(xué)效應(yīng)[J].云南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2001,16(1):5??8.

5種鏈格孢屬植物病原真菌對10種殺菌劑的敏感性比較嚴(yán)清平,??袁善奎,??王曉軍,??姜??輝

(農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥檢定所生物技術(shù)研究測試中心,北京??100026)

摘要??離體條件下測定并比較了10種殺菌劑對番茄早疫病菌、蘋果斑點(diǎn)落葉病菌、梨黑斑病菌、煙草赤星病菌和甘藍(lán)黑斑病菌等5種鏈格孢屬植物病原真菌的抗菌活性。結(jié)果表明,不同種的鏈格孢屬病菌對同一藥劑的敏感性相近;咪鮮胺、啶菌惡唑、苯醚甲環(huán)唑、異菌脲、腐霉利等5種殺菌劑對供試病菌菌絲生長的抑制活性最好,其EC50在0.01~1.28??g/mL之間;百菌清對病菌分生孢子萌發(fā)的抑制活性最高,其次是醚菌酯和嘧菌酯。關(guān)鍵詞??殺菌劑;??鏈格孢屬病菌;??菌絲生長;??孢子萌發(fā)中圖分類號??S482.2

*

ComparisonofthesensitivitiesoffiveAlternariaplant

pathogenstotenfungicides

YanQingping,??YuanShankui,??WangXiaojun,??JiangHui

(CenterforBiological&EnvironmentalTechnology,InstitutefortheControlofAgrochemicals,MinistryofAgriculture,Beijing??100026,China)

Abstract??Thesensitivitiesof5differentAlternariaplantpathogens,Alternariasolani,A.mali,A.brassicae,A.kikuchianaandA.longipesto10fungicidesweredeterminedinvitro.Theresultsshowedthatthesensitivityofdif??ferentAlternariaspeciestothesamefungicidewassimilar.Prochloraz,SYP??Z048,difenoconazole,iprodioneandprocymidonehadrelativelyhigheractivitytomycelialgrowthofthe5pathogensthantheotherfungicides,andthe50%effectiveconcentration(EC50)valuesrangedfrom0.01??g/mLto1.28??g/mL.Chlorothalonilhadthehighesteffectonsporegerminationofthepathogenstested,followedbykresoxim??methylandazoxystrobin.Keywords??fungicides;??Alternariaplantpathogens;??mycelialgrowth;??sporegermination

????鏈格孢屬(AlternariaNees)真菌是重要的植物

收稿日期:??2007??09??07??????修訂日期:??2007??10??11*通訊作者Tel:010??85390886;E??mail:skyuan7611@yahoo.com.cn病原菌屬之一,除少數(shù)種可侵染人和動物,引起皮

??????????????????????????

調(diào)查研究

??第34卷第2期(2008)

PLANTPROTECTION??Vol.34No.2(2008)

??125??

癬、甲癬、顎骨髓炎等疾病外,大多數(shù)種可寄生于植物引起包括玉米、小麥、煙草、馬鈴薯、番茄、蘋果、梨、甘藍(lán)、人參等的幾十種植物病害[1??2]。這類病菌的代謝產(chǎn)物即毒素可導(dǎo)致受害植物產(chǎn)生各種癥狀,如黑斑病、褐斑病、莖枯病、赤星病等,嚴(yán)重影響作物的產(chǎn)量和品質(zhì),給農(nóng)業(yè)生產(chǎn)帶來了巨大損失。過去應(yīng)用較多的苯并咪唑類殺菌劑如多菌靈等對這類病害的防效通常較差或無效,市場上專門用于防治這類病害的藥劑品種較少,給生產(chǎn)上選擇防治這類病害的藥劑帶來困難。

本文測定并比較了10種殺菌劑對5種常見鏈格孢屬病菌的離體抗菌活性,旨在了解這些藥劑對鏈格孢屬真菌的活性,以及這些藥劑對鏈格孢屬病菌的作用特點(diǎn),從而為生產(chǎn)上防治這類病害時(shí)科學(xué)用藥以及企業(yè)開發(fā)混配藥劑提供理論參考。

[3]

梨黑斑病菌、煙草赤星病菌在PSA平板上,(25??1)??、12h??12h(D??L)光照條件下培養(yǎng)8d后,向培養(yǎng)皿中加入10mL無菌水,用無菌曲玻棒輕輕洗下菌落中的分生孢子,盡量減少菌絲斷裂。兩層無菌紗布過濾得到分生孢子懸浮液,在顯微鏡下(10??10倍)檢查孢子數(shù),平均每視野60~100個孢子即可。

1.4??藥劑敏感性測定方法

1.4.1??供試藥劑對病菌菌絲生長的影響

采用平皿菌絲生長抑制法測定供試藥劑對各病菌菌絲生長的抑制活性,即在預(yù)試驗(yàn)的基礎(chǔ)上,選擇各藥劑對病菌菌絲生長抑制率在10%~90%范圍內(nèi)的5個濃度;將配制好的供試藥劑母液按照設(shè)定的濃度比例加入到已融化并冷卻至50??左右的PSA培養(yǎng)基中,充分混勻后分別倒入3個滅菌的培養(yǎng)皿中,制成系列濃度的含藥PSA平板,以不加藥劑但含等量溶劑的PSA平板為對照。用直徑為6mm的打孔器在預(yù)培養(yǎng)的菌落邊緣的同一圓周上打取菌餅,菌絲面朝下接種到含藥培養(yǎng)基平板,置于(25??1)??下黑暗培養(yǎng),待對照的菌落邊緣接近皿壁時(shí)用十字交叉法測量各處理的菌落直徑,并求出3次重復(fù)的平均值,得出各處理的平均菌落增長直徑(=平均菌落直徑-6mm),并計(jì)算各藥劑處理對病菌的菌絲生長抑制率。

抑制率=[對照的菌落增長直徑(mm)-處理的菌落增長直徑(mm)]/[對照的菌落增長直徑(mm)]??100%。

以試驗(yàn)中設(shè)定的濃度對數(shù)為橫坐標(biāo)(x),抑制率幾率值為縱坐標(biāo)(y),求出各藥劑對供試病菌的毒力回歸曲線方程y=a+bx、相關(guān)系數(shù)r以及有效抑制中濃度(EC50)。最后根據(jù)EC50值,分析比較不同殺菌劑對供試病菌菌絲生長的影響。

1.4.2??供試藥劑對4種病菌分生孢子萌發(fā)的影響采用瓊膠平板法測定藥劑對病菌分生孢子萌發(fā)的影響。將各藥劑分別加入到滅菌冷卻至50??左右的水瓊膠培養(yǎng)基(瓊脂2%,蔗糖1%)中,制成濃度為1mg/L、10mg/L、100mg/L的帶毒瓊膠平板,并設(shè)不加藥劑的瓊膠平板為對照。待瓊膠平板完全凝固后,以移液取200??L孢子懸浮液加入平板中,用曲玻棒涂抹均勻,置于(25??1)??下黑暗培養(yǎng)10~12h。待對照孢子萌發(fā)率超過90%以上時(shí),在顯微鏡下(10??10倍)檢查各處理平板孢子萌發(fā)數(shù),每處理計(jì)數(shù)200個以上孢子。與空白對照比較計(jì)算各藥劑對病菌分生孢子萌發(fā)的抑制率,1??材料與方法

1.1??供試病菌

番茄早疫病菌(Alternariasolani)、蘋果斑點(diǎn)落葉病菌(A.mali)、甘藍(lán)黑斑病菌(A.brassicae)、梨黑斑病菌(A.kikuchiana)、煙草赤星病菌(A.lon??gipes),均為本研究室保存菌種。1.2??供試藥劑

試驗(yàn)藥劑為95.4%醚菌酯(kresoxim??methyl)原藥(江蘇耕耘化學(xué)有限公司)、98.1%腐霉利(pro??cymidone)原藥(浙江禾益農(nóng)化有限公司)、98.2%多菌靈(carbendazim)原藥(江蘇蘇化集團(tuán)新沂農(nóng)化有限公司)、25%嘧菌酯(azoxystrobin)懸浮劑(先正達(dá)公司)、96%異菌脲(iprodione)原藥(江蘇蘇化集團(tuán)新沂農(nóng)化有限公司)、95%酮(triadimefon)原藥(江蘇蘇化集團(tuán)新沂農(nóng)化有限公司)、99.3%咪鮮胺(prochloraz)原藥(樂斯化學(xué)有限公司)、95.2%苯醚甲環(huán)唑(difenoconazole)原藥(江蘇耕耘化學(xué)有限公司)、84%啶菌惡唑(SYP??Z048)EC(沈陽化工研究院)、98%百菌清(chlorothalonil)原藥(江蘇寶靈化工有限公司)。除將25%嘧菌酯SC溶于無菌水外,其余原藥均溶于丙酮中制成適當(dāng)濃度的母液保存于4??冰箱中備用。

1.3??供試病菌的培養(yǎng)及孢子懸浮液的制備1.3.1??供試病菌的預(yù)培養(yǎng)

將5種供試病菌在馬鈴薯蔗糖瓊脂(PSA)平板上,(25??1)??下黑暗培養(yǎng),待菌落邊緣接近皿壁時(shí),即可打取菌餅用于試驗(yàn)。

1.3.2??供試病菌孢子懸浮液的制備

將4種供試病菌番茄早疫病菌、甘藍(lán)黑斑病菌、??126??

??第34卷第2期(2008)??????????????????????????

PLANTPROTECTION??Vol.34No.2(2008)調(diào)查研究

分析比較不同殺菌劑對供試病菌分生孢子萌發(fā)的

影響。

2??結(jié)果與分析

2.1??對病菌菌絲生長的影響

供試10種藥劑對5種鏈格孢屬病原真菌菌絲生長的毒力測定結(jié)果見表1,從表中可見,異菌脲、腐霉利、咪鮮胺、苯醚甲環(huán)唑、啶菌惡唑等5種藥劑對病菌菌絲生長的抑制活性均較高,除異菌脲對番

茄早疫病菌的EC50為1.28??g/mL外,其余EC50均小于1??g/mL,且這些藥劑對不同種的鏈格孢屬病菌的活性差異較小,EC50均相差在5倍以內(nèi)。此外,結(jié)果也表明生產(chǎn)上應(yīng)用較多的苯并咪唑類殺菌劑多菌靈對這類病菌的活性較差,EC50均大于100??g/mL。盡管酮、咪鮮胺、苯醚甲環(huán)唑等均為病菌麥角甾醇生物合成抑制劑,但它們對鏈格孢屬病菌的活性存在差異,后兩種藥劑均表現(xiàn)出了較高的活性。

LC50/??g??mL-1

表1??10種殺菌劑對5種鏈格孢屬(Alternaria)植物病原菌菌絲生長的有效抑制中濃度

藥劑名稱百菌清異菌脲腐霉利酮咪鮮胺苯醚甲環(huán)唑啶菌惡唑醚菌酯嘧菌酯多菌靈

煙草赤星病(A.longipes)

57.880.360.51.830.110.340.3269.85>200.00105.76

蘋果斑點(diǎn)落葉病菌

(A.mali)

23.610.760.6270.460.010.170.3775.88>200.00168.17

甘藍(lán)黑斑病菌(A.brassicae)

35.090.540.6920.920.020.160.1035.97>200.00138.41

梨黑斑病菌(A.kikuchiana)

77.290.410.5269.210.120.290.29109.05>200.00131.78

番茄早疫病菌(A.solani)

22.711.280.50.350.120.160.35111.75>200.00258.49

2.2??對分生孢子萌發(fā)的影響

由于本研究所用蘋果斑點(diǎn)落葉病菌菌株的分生孢子產(chǎn)生量較低,因此僅測定了其余4種鏈格孢屬真菌的分生孢子萌發(fā)對10種藥劑的敏感性。結(jié)果表明(表2),不同藥劑對同一種鏈格孢真菌分生孢子萌發(fā)的抑制活性不同,但同一藥劑對不同種鏈格孢病菌的活性相近。在藥劑濃度為100??g/mL時(shí),百菌清對4種供試病菌分生孢子萌發(fā)的相對抑制率

煙草赤星病菌(A.longipes)100??g/mL

百菌清異菌脲腐霉利酮咪鮮胺苯醚甲環(huán)唑啶菌惡唑醚菌酯嘧菌酯多菌靈

97.381.368.01.721.017.069.591.884.25.7

10??g/mL87.413.511.72.616.513.721.0.381.25.0

1??g/mL86.94.56.61.09.48.511.052.150.24.6

甘藍(lán)黑斑病菌(A.brassicae)100??g/mL100.048.783.420.814.751.985.378.078.012.4

10??g/mL100.0014.511.110.83.052.841.857.50

達(dá)到了94.28%~100%,抑制作用最強(qiáng),其次是醚菌酯(78.02%~91.79%)、嘧菌酯(78.04%~.95%)、啶菌惡唑(69.50%~88.39%)、腐霉利(68.00%~85.72%),抑制作用較低的殺菌劑有異菌脲(48.70%~73.79%)、咪鮮胺(14.72%~75.63%)、苯醚甲環(huán)唑(15.45%~51.93%),抑制作用最低的殺菌劑有酮(1.74%~20.84%)和多菌靈(5.67%~12.35%)。在藥劑濃度為10??g/mL時(shí),除百菌清、醚菌

%

番茄早疫病菌

(A.solani)

100??g/mL94.361.982.52.470.915.587.585.285.28.3

10??g/mL88.03.58.81.822.54.025.135.333.70.9

1??g/mL83.91.36.82.013.67.320.520.029.54.3

梨黑斑病菌(A.kikuchiana)100??g/mL97.373.885.73.275.616.788.491.0.06.1

10??g/mL87.34.212.32.222.913.428.438.248.74.6

1??g/mL85.63.37.30.614.38.119.721.822.74.2

表2??10種殺菌劑對4種鏈格孢屬(Alternaria)病菌的分生孢子萌發(fā)抑制率

殺菌劑名稱

1??g/mL98.902.2001.825.330.047.10

??????????????????????????

調(diào)查研究

??第34卷第2期(2008)

PLANTPROTECTION??Vol.34No.2(2008)

??127??

酯、嘧菌酯、啶菌惡唑4種殺菌劑仍具有較高的相對抑制率外,其余6種殺菌劑的相對抑制率均低于25%。在藥劑濃度為1??g/mL時(shí),百菌清對4種供試病菌分生孢子的萌發(fā)仍有80%以上的相對抑制率,醚菌酯和嘧菌酯則具有20.01%~52.09%的相對抑制率,啶菌惡唑僅有11.00%~25.23%的相對抑制率。

用多年來未出現(xiàn)抗藥性問題,建議與其他高效內(nèi)吸性藥劑混配使用防治這類病害;異菌脲和腐霉利均為二甲酰亞胺類殺菌劑,均對菌絲生長的抑制活性較高,但對孢子萌發(fā)的抑制作用較低,且內(nèi)吸性較差,抗性風(fēng)險(xiǎn)較高;酮、咪鮮胺、苯醚甲環(huán)唑等均是麥角甾醇生物合成抑制劑,均對孢子萌發(fā)的抑制活性較差,但后面兩種藥劑對菌絲生長抑制活性較高;啶菌惡唑是我國自主研制的新穎結(jié)構(gòu)殺菌劑,對菌絲生長的抑制活性較高,對孢子萌發(fā)也有一定的抑制活性;醚菌酯和嘧菌酯為甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑,均是新近開發(fā)的線粒體呼吸抑制劑,對病菌孢子萌發(fā)活性較高,但由于在離體培養(yǎng)基平板上沒有抑制病菌旁路呼吸代謝途徑的物質(zhì),因此降低了其對菌絲生長的抑制活性,而在植物體內(nèi)存在抑制旁路氧化酶(AOX)的(類)黃酮類物質(zhì)[6],因此在植物活體上的活性較高,已有報(bào)道其在防治番茄早疫病及蘋果斑點(diǎn)落葉病具有優(yōu)良的防治效果[7??8],但已有報(bào)道病菌對甲氧基丙烯酸酯類藥劑產(chǎn)生了抗性問題。因此,生產(chǎn)上可根據(jù)這些藥劑的活性和作用特點(diǎn),輪換或混配使用用于鏈格孢屬真菌病害的防治,以達(dá)到理想的防治效果,并能延長這些藥劑的使用壽命。

3??討論

本文所選用的5種供試植物病原菌所致病害均是生產(chǎn)上發(fā)生普遍、危害嚴(yán)重的鏈格孢屬病菌,如番茄早疫病又稱輪紋病,全國各地普遍發(fā)生,是番茄重要病害之一,發(fā)病嚴(yán)重時(shí)引起落葉、落果和斷枝,對產(chǎn)量影響很大,常年減產(chǎn)20%~30%,嚴(yán)重時(shí)達(dá)50%以上,甚至絕產(chǎn)

[4]

;煙草赤星病是煙葉

成熟后期重要的葉部病害,是煙草生產(chǎn)上威脅最大的病害之一,對煙草的產(chǎn)量和品質(zhì)均造成嚴(yán)重影響,自12年首次報(bào)道煙草赤星病以來,曾幾次給世界煙葉生產(chǎn)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失

[5]

。對這類病

害的防治目前均缺乏有效的抗病作物品種,主要依賴于化學(xué)藥劑進(jìn)行防治,過去防治此類病害使用的藥劑主要有二硫代氨基甲酸酯類、芳烴類、二甲酰亞胺類等,常見的品種如代森錳鋅、百菌清、菌核凈、異菌脲、腐霉利等,但這些藥劑防治效果較好,治療效果差,而且這些殺菌劑已經(jīng)使用了十幾年甚至幾十年,有些品種的施用量已經(jīng)達(dá)到原有用量的數(shù)倍,抗藥性問題嚴(yán)重,這不僅提高了農(nóng)業(yè)生產(chǎn)成本,而且由于過量用藥導(dǎo)致環(huán)境污染嚴(yán)重,危害生物安全。因此,研究使用新型高效、廣譜、作用機(jī)理不同、結(jié)果新穎的殺菌劑以及科學(xué)合理使用現(xiàn)有藥劑防治這類病害是生產(chǎn)上亟待解決的問題。

本研究表明,同一藥劑對不同種類的鏈格孢屬植物病菌的活性相近,因此,生產(chǎn)上在選擇藥劑防治此類病害時(shí)可相互借鑒用藥方案,但不同種的鏈格孢病菌由于用藥歷史和防治水平的差異,其抗藥性發(fā)生狀況也不盡相同。結(jié)果表明苯并咪唑類的多菌靈無論對菌絲生長還是孢子萌發(fā)的活性均較低;百菌清雖然對菌絲生長的抑制活性較差,但對孢子萌發(fā)的抑制活性高,其為多作用位點(diǎn)保護(hù)性殺菌劑,使參考文獻(xiàn)

[1]??王洪凱,張?zhí)煊?張猛.鏈格孢屬真菌分類研究進(jìn)展[J].山東農(nóng)

業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2001,32(3):406??410.

[2]??陸家云.植物病害診斷[M].第2版.北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,

1997:162??166.

[3]??崔迪,王繼華,陳捷,等.鏈格孢屬真菌對農(nóng)作物的危害[J].

哈爾濱師范大學(xué)自然科學(xué)學(xué)報(bào),2005,21(3):87??91.

[4]??徐志剛.普通植物病理學(xué)[M].北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,

1997:97.

[5]??StavelyJR,MainCE.Influenceoftemperatureandotherfac??

torsoninitiationoftobaccobrownspot[J].Phytopathology,1970,60:1591??1596.

[6]??張舒亞,周明國.甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑的殺菌劑的生物學(xué)

及應(yīng)用技術(shù)研究[C]??周明國.中國植物病害化學(xué)防治研究(第3卷).北京:中國農(nóng)業(yè)科技出版社,2002:1??10.

[7]??時(shí)春喜,嚴(yán)勇敢,楊樺,等.阿米西達(dá)水懸浮劑防治蘋果病害

的應(yīng)用研究[J].陜西師范大學(xué)學(xué)報(bào),2005,33(4):90??94.[8]??楊華,崔元玗,甘中祥,等.新藥劑防治加工番茄早疫病藥效

的研究[J].農(nóng)業(yè)科學(xué),2004,41(5):363??366.